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苯酚-硫酸法即是檢測總糖含量,多糖在濃硫酸作用下,水解生成單糖,並迅速脫水生成糠醛衍生物,然後與苯酚縮合成橙翻譯公司化合物,且顏色穩定,在波長490nm處有最大 ...
簡介苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖,並迅速脫水生成糖醛衍生物,然後與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。
原理多糖在硫酸的作用下先水解成單糖,並迅速脫水生成糖醛衍生物,然後與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。
試劑1. 濃硫酸:分析純,95.5% 2. 80%苯酚:80克苯酚(分析純重蒸餾試劑)加20克水使之溶解,可置冰櫃中避光長期儲存。 3. 6%苯酚:臨用前以80%苯酚配製。(每次測定均需現配) 4. 標準葡聚糖(Dextran,瑞典[1]Pharmacia),或分析純葡萄糖。 5. 15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA加85克水使之溶解,可置冰櫃中長期儲存。 6. 5%三氯乙酸(5%TCA):25克TCA加475克水使之溶解,可置冰櫃中長期儲存。 7. 6mol/L 氫氧化鈉:120克分析純氫氧化鈉溶於500ml水。 8. 6mol/L 鹽酸
操作1.製作標準曲線:準確稱取標準葡聚糖(或葡萄糖)20mg於500ml容量瓶中,加水至刻度,分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml,然後加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻,室溫放置20分鐘以後於490nm測光密度,以2.0ml水按同樣顯色操作為空白,橫坐標為多糖微克數,縱坐標為光密度值[2],得標準曲線。 2.樣品含量測定: ①取樣品1克(濕樣)加1ml 15%TCA溶液研磨,再加少許5%TCA溶液研磨,倒上清液於10毫升離心管中,再加少許5%TCA溶液研磨,倒上清液,重複3次。最後一次將殘渣一起到入離心管。注意:總的溶液不要超出10毫升。(既不要超出離心管的容量)。 ②離心,轉速3000轉/分鐘,共三次。第一次15分鐘,取上清液。後兩次各5分鐘取上清液到25毫升錐形比色...
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