米氏常数 | 食品添加物合法業者資訊網
米氏常数(Km)的含义是酶促反应达最大速度(Vm)一半时的底物(S)的浓度。它是酶的一个特征性物理量,其大小与酶的性质有关。它被广泛应用到生物化学、分子生物学、 ...
在20世纪初期,就已经发现了酶被其底物所饱和的现象,而这种现象在非酶促反应中,则是不存在的,后来发现底物浓度的改变,对酶反应速度的影响较为复杂,1913年前后Michaelis和Menten作了大量的定量研究,积累了足够的实验证据,从酶被底物饱和的现象出发,按照中间产物设想,提出了酶促反应动力学的基本原理,并归纳为一个数学表达式,称之为米氏方程式:
[E]+[S]↔[ES]↔P+[E]
v=Vm[s]/(Km+[s])=Vm/(1+Km/[s])
式中,[E]为游离酶浓度;[S]为底物浓度;[ES]为酶与底物结合的中间络合物浓度;v为酶促反应速度;Vm为酶促反应最大速度;Km为米氏常数,是酶促反应达最大速度(Vm)一半时的底物(S)的浓度
Km的含义是酶促反应达最大速度(Vm)一半时的底物(S)的浓度。,即当V=Vm/2时,【S】=Km,单位为mol/l。Km是酶极为重要的动力学参数,其物理含义是指ES复合物的消失速度常数(k-1+k2)与形成速度常数(k1)之比。
Km即是当反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。从v—[s]矩形双曲线上可得V,再从V/2处可求得Km值,但实际上,即使用很大的底物浓度,也只能得到趋近于V的反应速度,而达不到真正的V,因此测不到准确的Km值,为了得到准确的Km值,可以把米氏方程式加以改变,使之成为斜截式:y=kx+b的直线方程,然后用图解法求出Km值 [1]。
1.LineweaverBurk方程(双倒数作图法) 1/V=Km+[S]/Vmax[S]改写成1/V=Km/Vmax[S]+1/Vmax实验时选择不同的[S]测定相应的v,求出两者的倒数,以1/v对1/[S]绘出工作曲线如下图,然后利用斜率,换算出Km。
实际上,由于操作条件和操作技能所限,以及操作时准确度达不倒要求,引入误差太大等原因,常常得不到这样的一条理想的直线,那么它的斜率就不是一个定值,因而Km的值就不能直接由这...
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